利用RNase H2辅助的四引物扩增难治突变系统(Tetra-ARMS)结合重组酶聚合酶扩增(RPA)及侧向流试纸条,实现SLCO1B1基因rs4149056单核苷酸多态性(SNP)的快速超灵敏床旁检测
单核苷酸多态性(SNP)是关键的遗传变异,在疾病诊断、治疗和精准医学中发挥重要作用。传统SNP检测方法(如DNA测序和TaqMan实时荧光PCR)虽结果可靠,但常受操作复杂、耗时长及需昂贵设备等限制,使其在资源有限环境下的床旁检测(POCT)中适用性较低。
本研究利用RNase H2对SNP位点的精准识别能力,开发了一种超灵敏(10拷贝/反应)且快速(30分钟内完成)的创新检测方法——将RNase H2辅助的四引物扩增难治突变系统重组酶聚合酶扩增技术(RTAR)与侧向流试纸条(LFS)结合,用于检测SLCO1B1基因的rs4149056 SNP。该方法通过对SNP位点进行等温双向扩增,并为每个位点标记独特标签以实现精准识别。临床样本基因型(TT、TC或CC)可通过观察侧向流检测中T1和T2线的颜色变化确定,为基因型区分提供了清晰可靠的方法。
研究通过检测30份临床血液样本评估他汀类药物降脂疗效,验证了RTAR-LFS的敏感性达92.5%、特异性达100%。此外,该方法在干血斑、口腔拭子和唾液等多种样本类型中均证实适用。这些结果表明,RTAR-LFS在低成本、高特异性和敏感性的SNP检测中具有巨大潜力,尤其适用于资源有限地区。
服务对象 : 成都中医药大学
发表时间: 2025 年 10 月 3 日
发表期刊: Talanta
文章链接: https://doi.org/10.1016/j.talanta.2025.128934
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